（ELISA）
4.1 试样的准备
为保证样品充分被提取，可适当延长涡旋时间、离心时间及离心转数，效果比较理想。
4.2 试剂的准备
4.2.1 不同批次的试剂盒不能混用，特异性不同。
4.2.2 ELISA中用的蒸馏水或去离子水，应为新鲜的和高质量的。
4.2.3 试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。
4.2.4 检测过程中应保持在室温20～25℃，避免阳光直射下进行。
4.3 加样
4.3.1 加样时应加在板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡，当有气泡时，可用干净的枪头小心刺破。
4.3.2 在加酶标物、底物、终止液时，建议尽量使用多道移液枪，以缩短反应时间。动作一定要迅速、准确，避免枪头碰壁或液体溅出。
4.4 保温孵育
4.4.1 一般为常温（20～25℃）温育，可根据室温适当调节保温时间。
4.4.2 孵育期间，如工作台温度过低，应适当铺垫若干纸巾或其他材料。
4.4.3 孵育时间的计算越规范越好，保持添加标准品的一致性。
4.5 洗板
4.5.1 将孔内液体甩干时，动作要快，要把整板垂直倒置，将液体甩出，防止各孔液体混流，在吸水纸上拍干，不可甩干。此种方法可有效避免试剂盒孔的交叉污染。
4.5.2 洗板次数和两次洗板间隔时间应尽量按照说明书进行。
4.6 显色
4.6.1 在一定时间内，阴性孔可保持无色，而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。适当提高温度有助于加速显色进行。
4.6.2 在定量测定中，加入底物后的反应温度和时间应按规定力求准确。
4.6.3 定性测定的显色可在室温进行，时间一般不需要严格控制，有时可根据阳性对照孔和阴性对照孔的显色情况适当缩短或延长反应时间，及时判断。
4.7 测定
4.7.1 对定量判定应绘制半对数曲线，从曲线上读出样品对应浓度值。
4.7.2 对于每次试验浓度值的准确性判定可观察标准样品的吸光度值是否为线性关系，即吸光度值是否呈梯度递减来判定。当吸光度值无明显梯度时应考虑重新检测。
4.7.3 当板间差异性大时，可能原因是板与板之间孵育时间相差太大，板与板之间洗涤不一致，移液枪使用不当，温度不同等。
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