黄曲毒素(Aflatoxin),也称作黄曲霉素,是一种有强烈生物毒性的化合物,常由黄曲霉及另外几种霉菌在霉变的谷物中产生,如大米、豆类、花生等,是目前为止最强的致癌物质。加热至280℃以上才开始分解,所以一般的加热不易破坏其结构。黄曲毒素主要有B1、B2、G1与G2等4种,又以B1的毒性最强。食米储存不当,极容易发霉变黄,产生黄曲毒素。黄曲毒素与肝癌有密切关系,还会引起组织失血、厌食等症状。1960年在英国发生了因喂食黄曲毒素花生粕而导致大批火鸡暴毙事件。本试剂盒可以检测谷物、玉米、饲料及食用油样品中的黄曲霉毒素B1。
试剂内容1、黄曲霉毒素B1酶标板(Microtiter well plate):每条8孔,一板12条。
2、黄曲霉毒素B1标准品溶液(Aflatoxin B1 standard):
0 ppb、0.1 ppb、0.3 ppb、0.9 ppb、2.7 ppb、8.1 ppb 各一瓶,1mL /瓶。
3、黄曲霉毒素B1酶结合物(Enzyme Conjugate):一瓶,6mL /瓶。
4、10倍浓缩洗涤液(10X Concentrate Washing Solution):一瓶,50 mL /瓶。
5、底物液A(Substrate Solution A):一瓶,6mL /瓶。6、底物液B(Substrate Solution B):一瓶,6mL /瓶。
7、终止液(Stop Solution):一瓶,6mL /瓶。
试剂套组使用说明
A、注意事项
1. 将待测样品、酶标板、标准品溶液、10倍浓缩洗涤液、酶结合物、底物液A、底物液B、终止液,在25℃环境下,至少回温40分钟。
2. 工作洗涤液配制(用于洗板)
利用蒸馏水将10倍浓缩洗涤液以1:9比例稀释(即 1 mL 10倍浓缩洗涤液 + 9 mL蒸馏水),即可作为清洗微孔使用的工作洗涤液。(10倍浓缩洗涤液请确实回温后使用,并请检查溶液底部之结晶是否完全溶解。)
3. 70%甲醇溶液配制
准确量取70ml甲醇,加入30ml去离子,即为70%甲醇溶液。配制好的甲醇溶液请尽快使用,若用不完请保存于2~8 ℃,请勿超过一星期。
4. 用剩余的测试条孔则放回铝箔袋中干燥保存,储存于2~8 ℃冰箱。保质期为12
个月。
B、未提供设备及试剂:
酶标仪(Microtiter plate spectrophotometer):检测波长450nm,参考波长630nm
样本前处理所需设备及试剂:离心机、天平、均质器、聚苯乙烯离心管(2ml,
15ml)、PH试纸、甲醇
可调式50 μL,100μL, 1000μL 移液枪(Variable micropipettes)
C、样品处理:
1、谷物、玉米、饲料、食用油(稀释倍数:10)
---取5g具有代表性的样品,用打碎机粉碎成过20目的样品,准确称取2g粉碎后样品;
---加入10ml 70%甲醇水(见配液3),强力振荡5分钟,再加入10ml去离子水,强力振荡5分钟,5000g离心10分钟后,取1ml上清液于2ml离心管中(注意:如检测样品为食用油时,取下层液作为检测液,并且取下层液时尽可能不要取到上层的油相,不然可能影响实验结果);
---用1M HCl或1M NaOH调PH至7-8;
---取50μl进行分析;
注意:当样本检测吸光度值超出标准品范围时,请再次用35%甲醇水稀释,在计算时再乘上响应的稀释倍数即可。